物镜和数字瞄准相机

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培养基上，然后用显微镜盖玻片盖住载玻片。使用配备 Plan Apo ×40 DIC M N2 物镜和 DS-Fi2 数码相机的 Nikon Eclipse Ti-E 显微镜对细胞进行成像，对 GFP 使用 FITC 滤光片，对 mCherry 使用 TxRed 滤光片。 酵母细胞的细胞周期分析 使用标准Li-Ac方法将编码ΔN Sic1-SULI、Δdb Clb2-SULI或Clb2(Δde) N -SULI-Clb2(Δde) C的质粒转化至BY4742中。挑取上述克隆或含有基因组整合的ADE2-SULI或ADE2-mCherry表达盒的克隆，在黑暗条件下培养直至OD 600达到约0.6。将细


胞连续稀释（1:10；第一个点为~2.5 × 10 4 个细胞）并在固体培养基中在光照或黑暗条件下培养3天。使用 Tanon-5200 对板进行成像。 为了分析细胞阶段的详细分布，收集在光照或黑暗条件下过夜培养的细胞，并通过与预冷的 70% EtOH 在 4 °C 下孵育过夜来固定。将细消费者手机号码数据库胞用 50 mM 柠檬酸钠缓冲液洗涤两次，并用 50 mM 柠檬酸钠（含有 0.1 mg/ml RNase A）重悬。37°C 2 小时后，加入等体积的 50 mM 柠檬酸钠（含 8 µg/ml 碘化丙啶），并在 37°C 下再孵育 4 小时。使用





配备 S Plan Fluor ELWD ×40、0.95 数值孔径 (NA) 的 Eclipse Ti 倒置显微镜系统（尼康）获取细胞周期阶段的图像。 细胞培养和转染 HEK293T (ATCC CRL-3216)（国家认证细胞培养物保藏中心，分子细胞科学卓越中心，CAS）细胞保存在补充有 10% 胎牛血清（Biological Industries）的高葡萄糖（HyClone）的 Dulbecco 改良 Eagle 培养基中37 °C，5% CO 2条件下，每 2 天分裂一次。根据制造商的建议，使用 Hieff Trans 脂质体转染试剂（目录号 40802ES02，YEASEN）进行 HEK293T 细胞的转染。简而言之，将 0.4 μg DNA 和 1.2 μl 转染试剂与 50 μl Opti-MEM (GIBCO) 混合，并在室温下孵育 20 分钟。将混合物添加到带有 1 号盖玻片 (Cellvis) 的 35 毫米四室